一、背景
呼吸機引起的肺損傷 （VILI） 是急性肺損傷 （ALI） 或急性呼吸窘迫綜合征 （ARDS） 患者最常見的并發癥之一。雖然p120是調節細胞連接的重要蛋白質，但應探索預防和治療VILI的進一步機制。
二、方法
用p12小干擾（si）RNA，p120 cDNA，野生型E-鈣粘蛋白并列膜結構域或K120R突變并列膜結構域（K83R-JMD）轉染的小鼠肺上皮細胞（MLE-83）進行20%循環拉伸2或4小時。此外，用c-Src抑制劑PP預處理的MLE-12細胞和小鼠2或RhoA抑制劑Y27632，分別經歷20%的循環拉伸或機械拉伸。此外，野生型C57BL / 6小鼠在機械通氣前轉染p120 siRNA-脂質體復合物。然后分析細胞裂解物和肺組織以檢測肺損傷。
三、結果
20%活性c-Src的循環拉伸，誘導E-鈣粘蛋白，p120和封閉素的降解。然而，p120的缺失增加了E-鈣粘蛋白的降解和內吞作用。免疫沉淀和免疫熒光結果顯示p120和E-鈣粘蛋白之間的關聯降低，而p120 siRNA和K83R-JMD組在20%循環拉伸后間隙形成增加。p120的缺失還降低了閉塞素水平，并通過增強RhoA活性降低了閉塞素和ZO-1的關聯。然而，封閉素和E-鈣粘蛋白水平的改變被PP逆轉2或Y27632處理與循環拉伸組相比。一致地，p120過表達組在20%循環拉伸后，連接蛋白的表達、再分布和解離均恢復。此外，p120在機械通氣下通過增加濕/干稱重比和增加p120耗盡小鼠細胞因子（腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-六）的產生來證實p<>在VILI中的作用。
細胞機械循環拉伸
圖1
環狀拉伸對粘附連接蛋白和緊密連接蛋白的影響。將柔性細胞板上的MLE-12細胞單層經受20%循環拉伸2或4小時。 （a）蛋白質印跡顯示p120，E-鈣粘蛋白和封閉素在循環拉伸后減少。（b） 提取膜和細胞質蛋白。通過蛋白質印跡測定E-鈣粘蛋白在膜和細胞質中的表達。周期性拉伸可誘導E-鈣粘蛋白內吞作用。（c）免疫熒光染色和定量數據顯示p120和E-鈣粘蛋白在循環拉伸下結合。固定MLE-12細胞并用抗p120和抗E-鈣粘蛋白染色，然后用Alexa偶聯的二抗染色。（d）肌動蛋白細胞骨架重塑是通過用德克薩斯紅偶聯鬼筆環肽（紅色）進行免疫熒光染色來確定的。由循環拉伸引起的細胞間隙用箭頭標記。細胞核（藍色）用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色。比例尺 = 10 μm。*p < 0.05 與對照組相比，+p < 0.05 與 CS 2 h 組相比。實驗至少重復三次
四、結論
p120通過調節粘附和緊密連接來防止VILI。p120通過增加p120與E-鈣粘蛋白的并列膜結構域之間的關聯來抑制E-鈣粘蛋白內吞作用。此外，p120通過抑制RhoA活性來減少閉塞素的降解。這些發現說明了p120預防VILI的進一步機制，特別是對于ALI或ARDS患者。
國產細胞牽張拉伸應力培養系統
2. 細胞增殖后，選擇拉伸模式并開始循環刺激。
3. 根據實驗目標收獲/處理細胞，分析數據。
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